Использование инновационной системы Parasep

А. А. Морозова, студентка 5-го курса факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Вологодская государственная молочно-хозяйственная академия имени Н. В. Верещагина», Вологда

 

Осуществляя комплексную диагностику гельминтозов, включающую в себя выявление симптомокомплекса, эпизоотологических данных и проведение лабораторного исследования, необходимо выбрать оптимальный метод последнего, позволяющий наиболее точно дифференцировать гельминтов. В то же время этот метод должен быть прост в использовании и отнимать минимальное количество затрат труда и времени.

Актуальность проблемы. В настоящее время патогенная роль паразитов признается и научным миром, и специалистами-практиками, но в силу крупных изменений, произошедших в технологии разведения и ведения животноводства за последние годы, многие проблемы диагностики и лечебно-профилактических мероприятий заметно осложнились. Кроме того, в большинстве ветеринарных клиник, к сожалению, мало внимания уделяется определению возбудителя паразитарных заболеваний вплоть до видовой принадлежности, что влечет за собой постановку неправильного диагноза и назначение несоответствующих лечебных и профилактических мероприятий. А это, в свою очередь, наносит вред здоровью животных и создает угрозу заражения человека.

Гельминтозы диагностируют, проводя комплексные исследования: клинические, эпизоотологические и лабораторные. При этом устанавливают экстенсивность и интенсивность инвазии, а также проводят дифференциацию гельминтов. При анализе эпизоотологических данных необходимо учитывать зональность, сезонность, вид, возраст, породные особенности животных [2].

 В работе ветеринарного врача лабораторные методы диагностики являются приоритетными, так как их достоверность по сравнению со многими другими методами бесспорна. Диагностика гельминтозов имеет свои особенности, и точный диагноз может быть поставлен только при обнаружении возбудителя болезни.

Лабораторная диагностика паразитарных заболеваний применяется:

— с диагностической целью;

— для контроля эффективности лечения паразитарных заболеваний;

— для оценки качества проведения комплекса противопаразитарных мероприятий;

— для выявления источников заражения;

— для установления уровня инвазии  животных.

В настоящее время в медицине для этих целей широко применяется система Parasep и мы решили оценить эффективность ее использования в ветеринарии.

Описание системы Parasep

 Parasep — готовое устройство одноразового использования, предназначенное для эффективного концентрирования яиц и личинок гельминтов, цист и ооцист простейших модифицированным седиментационным эфир-формалиновым методом.

Система Parasep состоит из одноразовых пластиковых пробирок для взятия, фильтрации и концентрации проб фекалий (в пробирке для помещения пробы находится буферный раствор 10 % формалина в объеме 2,4 мл), а также   конических камер с фильтрами-шпателями.

 

  

Одноразовые пробирки - концентраторы Parasep

Для копрологического анализа с  помощью разложенного на конце конической камеры шпателя в  пробирку с реактивом мы вносили 0,5 г пробы фекалий. Пробирку герметично закрывали и перемешивали ее содержимое до однородной консистенции, используя камеру со шпателем.

Камеру с фильтром и пробирку с образцом соединяли с помощью резьбы. В таком виде образец может храниться до 24 часов при комнатной температуре. Структура и форма исследуемых объектов при этом не нарушаются. Для более длительного хранения образец помещают в холодильник (при температуре от 0 до +8° С).

Получившееся устройство центрифугировали в течение 1 минуты при 3000 оборотах, при этом содержащиеся в пробе паразиты проходили через фильтр и скапливались в нижнем отсеке пробирки. Далее коническую камеру с отфильтрованным осадком аккуратно отсоединяли, удаляли надосадочную жидкость и отбирали осадок для микроскопического исследования. Фильтрация пробы кала происходила во время центрифугирования.  Фильтр расположен вертикально, и фильтрация происходит латерально через фильтр толщиной 425 мкм. Это приводит к тому, что грубые частицы неперевареной пищи и клетчатки оседают в смесительной камере, а жидкая часть с выделившимися паразитами и их яйцами под давлением фильтруется и центрифугируется в конической пробирке. В нижний отдел пробирки попадает минимум твердых компонентов пробы и максимум имеющихся паразитов и яиц [5].

 

Преимущества использования системы Parasep перед другими методами копрологического исследования

Гельминтоовоскопия включает в себя ряд методов, используемых для обнаружения яиц гельминтов, половозрелых и юных гельминтов или их фрагментов. Это флотационные и седиментационные методы, такие, как метод нативного мазка, метод последовательных промываний по К. И.Скрябину, методы Фюллеборна, Дарлинга, Бреза, а также метод последовательных промываний. Методы флотации (всплывания) основаны на использовании насыщенных растворов солей с более высокой плотностью (1,18—1,50), чем плотность яиц паразитических червей. В лабораторной практике наиболее часто применяют насыщенный раствор натрия хлорида, или поваренной соли (плотность 1,18—1,2). Методы осаждения требуют смешивание проб фекалий с водой, плотность которой меньше плотности яиц гельминтов [4].

Все перечисленные методы достаточно трудоемки, требуют много времени и контакта с пробами, а проведение исследований с их помощью оставляет много отходов.

 

Использование для гельминтоовоскопии системы Parasep значительно облегчает и повышает эффективность копрологического исследования.

1. Сокращается требуемое для анализа время
2. Снижается риск заражения персонала (контакт с пробами отсутствует)
3. Уменьшается количество отходов, образующихся в результате

проведения анализа.

1. Обеспечивается возможность хранения материала в течении 24 часов.
2. Оптимизируется стандартизация метода анализа.
3. Повышается выявляемость паразитов.
4. Повышается достоверность анализа.
5. Исключается необходимость подготовки и повторной обработки

посуды. [5]

Собственные исследования

Мы поставили перед собой цель применить систему Parasep в копрологическом исследовании, освоить этот метод и выявить его преимущества перед другими способами диагностики инвазионных болезней животных.

Для реализации поставленной цели нами исследовано 45 проб фекалий собак, кошек, морских свинок и шиншилл, владельцы которых обратились в ветеринарные клиники города Вологды. При этом использовалось следующее оборудование: одноразовые пробирки системы Parasep, центрифуга MPW - 340,  предметные и покровные стекла, бинокулярный  световой микроскоп и монокулярный световой микроскоп «МИКРОМЕД» Р-1.

Результаты исследования приведены в таблице.

 

Таблица

 Частота выявления возбудителей гельминтозов в регалиях мелких домашних животных с применением системы Parasep, абс.

Род возбудителя	Собаки, n=26	Кошки, n=15	Морские свинки, n=3	Шиншилла, n=1	Всего
Toxocara canis	3	—	—	—	3
Toxocara cati	—	2	—	—	2
Cystospora rivolta	1	—	—	—	1
Sarcocystis spp.	—	2	—	—	2
Criptosporidium parvum	3	—	—	—	3
Blastocystis spp.	—	—	1	1	2
Lamblia spp.	1	1	—	—	2

 

Обсуждение результатов

Полученные нами данные позволяют сделать вывод, что система Parasep имеет неоспоримые преимущества перед традиционными седиментационными и флотационными методами копрологического исследования.

Основной проблемой автоматизации микроскопирования является засоренность поля зрения фрагментами клетчатки, консистенция, форма и размер которых сходны с некоторыми типами гельминтов. Помимо проблем распознавания существует проблема большого количества объектов в кадре, зависящая от метода пробоподготовки. В связи с этим вероятность положительных находок в препаратах фекалий, приготовленных методами формалин-эфирного осаждения, выше, чем в мазках, приготовленных по методу Фюллеборна.

В пробах кала трех  собак были обнаружены яйца Toxocara canis. Цвет — серый, наружная оболочка ячеистого строения.

В двух пробах кала кошек найдены яйца Toxocara cati .

В одной пробе кала собаки обнаружены ооцисты Cystoisospora rivolta.

В двух  пробах кала кошек обнаружены спороцисты Sarcocystis spp.

В трех  пробах кала собак были найдены ооцисты Criptosporidium parvum [3].

Пробы кала морских свинок сначала были исследованы флотационным методом (инвазионного начала не обнаружено), а затем методом седиментации с использованием пробирок Parasep, и в одной пробе были найдены Blastocystis spp. В  пробе кала шиншиллы так же были обнаружены Blastocystis spp. В одной пробе кала собаки  и одной пробе кала кошки  были обнаружены цисты Lamblia spp. [1].

     Заключение

            Система Parasep позволяет совмещать флотационные и седименационные  методы, что на практике существенно экономит время проведения анализа.  Немаловажно и то, что контакт персонала с пробами минимален, поскольку нозологический профиль заболеваний предполагает возможность заражения таким заболеванием, как токсоплазмоз.

Ветеринарный врач должен помнить, что вовремя и правильно поставленный диагноз — это гарантия эффективного лечения животного, поэтому при проведении лабораторных исследований необходимо использовать наиболее достоверные и при этом простые в применении методы. Наш опыт показал, что при проведении гельминтоовоскопии методом выбора является система Parasep.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список литературы

 

1. Байрон Л., Блэгберн,[Y1]  Атлас ветеринарной паразитологии. Колледж медицины Университета Оберна, 1999. 45 с.
2. Воробьева М. Н., Равилов Р. Х., Герасимов В. В. Серологическая диагностика токсоплазмоза кошек // Актуальные вопросы ветеринарной медицины : материалы Сибирской междунар. науч. – практ. конф. Новосибирск, 2004. С. 67–68.
3. Крылов М. В. Определитель паразитических простейших. СПб., 1996.   602 с.
4. Новикова Т. В. Важнейшие инвазионные болезни мелких домашних животных в условиях европейского севера России : дисс. д-ра вет.наук. СПб., 2006. 224 с.
5. Сафиуллин Р. Т., Шибитов С. К., Котков А. В. Система пробоподготовки для паразитологических исследований «PARASEP» // Российский паразитологический журнал.  2008. № 3 С. 81-86.